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Réalisation de dilutions décimales en série
publication le 28/07/2010

Mots clefs : dilutions série suspensions microbiennes dénombrements microbiologie

réalisation de dilutions en série de suspension microbienne en vue de dénombrement

1. Objet

Réaliser des dilutions en série d'une suspension microbienne en vue de dénombrement.

2. Domaine d'application

Tout lieu où sont réalisées des études microbiologiques

  • laboratoires d'analyses
  • laboratoires de contrôles
  • laboratoires de recherche
  • laboratoires d'enseignement

3. Description de l'activité

3.1 - Matériel

Utiliser :

  • bec chauffant pour zone stérile,
  • portoirs pour tube,
  • pipettes à usage unique stériles (n+1),
  • auxiliaire de pipetage,
  • tubes contenant un volume exact de diluant (n),
  • boîtes de Pétri stériles,
  • Vortex,
  • milieu adapté en surfusion,
  • papier,
  • eau de Javel,
  • conteneur pour DASRI.

3.2 - Méthode à mettre en œuvre en images

1 - Préparer le matériel nécessaire à la réalisation de la manipualtion. 2 - Homogénéiser au Vortex le tube de suspension microbienne et laisser reposer. 3 - Placer le système d'aspiration, enlever et jeter l'emballage en maintenant la pipette dans la zone de stérilité. Ouvrir stérilement le tube de suspension (passage de l'ouverture dans le haut du bec chauffant).
4 - Prélever exactement 1 mL par aspiration en ne plongeant la pipette que d'une distance de 1 cm sous la surface. Refermer stérilement ce tube  puis vissage du bouchon (préalablement maintenu dans le creux de la main). 5 - Introduire le volume prélevé dans le tube de diluant ouvert stérilement en appuyant la pointe de la pipette sur la paroi du tube sans toucher le liquide et refermer le tube contenant la dilution. 6 - Jeter la pipette dans le conteneur pour DASRI adapté puis récupérer le système d'aspiration.

7 - Homogénéiser la dilution obtenue au vortex. Renouveler les opérations de 3 à 7 n fois en utilisant une pipette stérile à chaque fois. 8 - Ensemencer, à l'aide d'une seule pipette, les dilutions à tester en commençant par la plus élevée en déposant le contenu de la pipette au fond d'une boîte de Pétri qui sera complétée avec une gélose en surfusion préalablement refroidie. 9 - Éliminer les tubes de diluants contaminés dans les panières pour autoclavage adaptées (recyclage).