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enseigner la santé et la sécurité au travail

Secteur du laboratoire : repiquage de cellules sous PSM
publication le 20/06/2017

Mots clefs : cellules PSM poste sécurité microbiologique repiquages cultures analyses hottes flux laminaire BCM flask flacons étuves

Repiquage de cellules sous PSM

Fichiers téléchargeables :
  • fiche de cette analyse globale de la situation professionnelle
  • fiche de l'analyse en détail de la situation professionnelle

Damien, étudiant de première année en BTS biotechnologies réalise le repiquage d’une lignée continue de cellules Vero en milieu DMEM complet (DMEM - glutamine – pénicilline - sérum de veau fœtal). Cette lignée est isolée à partir de cellules épithéliales de rein d’un singe vert d’Afrique immortalisées expérimentalement.

Analyse de la situation de travail


  1. Observer et décrire avec précision la situation de travail en utilisant, par exemple, comme méthodes :
    • - 5M : Main d'oeuvre, Milieu, Méthode, Matériel, Matière,
    • - ITMaMi : Individus, Tâche, Matériel, Milieu ….
  2. Lister les dangers spécifiques à la situation de travail.

Démarche de prévention du risque biologique


  1. Repérer dans la chaîne de transmission : agent(s) biologique(s) et réservoir(s), voie(s) d’exposition.
  2. Lister le (les) dommage(s) possible(s).
  3. Identifier la (les) situation(s) exposante(s) au danger.
  4. Identifier le (les) évènement(s) déclencheur(s).
  5. Proposer des mesures de prévention : intrinsèque, collective, individuelle, instruction / information / formation.

Analyse globale de la situation de travail


Description de la situation de travail (méthode des 5M)
  • Main d’œuvre : Damien, étudiant de première année en BTS Biotechnologies
  • Milieu : laboratoire d’enseignement de confinement 2
  • Méthode : repiquage d’un flacon de culture de cellules adhérentes par décollement à l’aide de trypsine-EDTA et arrêt du décollement avec du DMEM complet
  • Matériel :
    • - Matériel à usage unique (flacon de culture, tube à hémolyse, pipettes, hématimètre)
    • - Matériel réutilisable : auxiliaire de pipetage
    • - Milieu DMEM complet (DMEM + glutamine + pénicilline + sérum de veau fœtal), trypsine EDTA
    • - Matériel d’analyse : étuve à CO2, microscope inversé, poste de sécurité microbiologique (PSM)
    • - Essuie tout à usage unique
    • - Détergent désinfectant
    • - Conteneur à DASRI (Déchet d’activités de soins à risque infectieux)
  • Matière : culture de cellules Vero à confluence
Identification des dangers spécifiques de la situation de travail
  • Danger biologique : agents biologiques pathogènes potentiellement présents dans la culture de cellules et dans le sérum de veau fœtal

Démarche de prévention du risque biologique


Repérage dans la chaîne de transmission
  • Agents biologiques :
    • - transmissibles par des cultures de cellules simiennes : même si les cellules Vero sont exemptes de virus, la probabilité de multiplication d’agents biologiques contaminants au sein de la culture est difficile à évaluer
    • - potentiellement contenus dans le sérum de veau fœtal (dont prions)
  • Réservoirs : cellules en culture, surnageant de culture, DMEM complet
  • Voies d’exposition : selon le virus contaminant
    • - cutanéo-muqueuse
    • - digestive
    • - aéroportée
Identification de la (des) situation (s) exposante(s) au danger
  • Gestion du flacon de culture: transport, ouverture
  • Prélèvement du surnageant ou des cellules en suspension
  • Dénombrement des cellules
  • Élimination des déchets : pipettes, flacon, tube etc…
  • Nettoyage désinfection des objets réutilisables et du plan de travail
Identification du (des) évènement(s) déclencheur(s)
  • Contacts cutanés avec le surnageant de culture ou les cellules en suspension
    • - projeté lors de l’ouverture du flacon
    • - présent accidentellement sur l’extérieur du flacon de culture, sur la paillasse, le matériel, les gants et les déchets (papier d’essuyage)
Identification du (des) dommage(s)
  • Maladies infectieuses
  • Encéphalopathies spongiformes bovines
Proposition de mesures de prévention
  • Protection intrinsèque :
    • - Utilisation de produit et matériel adaptés : sérum de veau fœtal stérilisé (vérifier la fiche de données sécurité), pipettes en plastique à usage unique, hématimètre à usage unique et auxiliaire de pipetage dédié et désinfecté avant l’introduction sous le PSM
    • - Utilisation de gestes et techniques adaptés
    • - Aménagement de l’espace de travail (étuve, microscope et PSM à proximité)
  • Protection collective :
    • - Nettoyage et désinfection du PSM et du matériel avant et après manipulation (pour éviter la contamination des cultures par des virus)
    • - Utilisation de PSM et d’étuve différents pour le repiquage de cellules et pour la manipulation de microorganismes
    • - Tri et gestion adaptés des déchets contaminés par la filière DASRI
  • Protection individuelle :
    • - Élimination immédiate des déchets contaminés (effluents, pipettes) dans le conteneur à DASRI placé sous le PSM
    • - Lavage des mains en cas de contact cutané
  • Instruction / Information / Formation :
    • - Formation à la démarche de prévention des risques biologiques
    • - Mise à disposition et respect de la procédure «Gestion des déchets»
    • - Mise à disposition de la procédure «Conduite à tenir en cas d’exposition à des produits biologiques contaminants»